ICS 07.100 C 04 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2838—2017 生活饮用水及水源水中 10 种抗生素的检验 方法 超高效液相色谱-质谱/质谱法 Standard Test method for 10 antibiotics in drinking and source water-ultra-High performance liquid chromatography-nass spectrometry / mass spectrometry 2017 - 12 - 11 发布 吉林省质量技术监督局 2018 - 04 - 01 实施 发 布 DB22/T 2838—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由吉林省卫生和计划生育委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。 本标准主要起草人：王蕴馨，刘思洁，李青，王博，石矛，郭金芝，姜楠，王慧，张文通。 I DB22/T 2838—2017 生活饮用水及水源水中 10 种抗生素的检验方法 超高效液相色谱质谱/质谱法 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问 题，使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了用超高效液相色谱质谱法测定生活饮用水及其水源水中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺 氯哒嗪、头孢氨苄、氧氟沙星、四环素、土霉素、金霉素、阿奇霉素、罗红霉素10 种抗生素。 本标准适用于生活饮用水及水源水中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、头孢氨苄、氧氟沙星、 四环素、土霉素、金霉素、阿奇霉素、罗红霉素10 种抗生素的测定。 本方法的最低检测质量浓度为：磺胺嘧啶0.1 μg/L、磺胺甲恶唑0.07 μg/L、磺胺氯哒嗪0.07 μg/L、头孢氨苄0.07 μg/L、氧氟沙星0.03 μg/L、四环素0.07 μg/L、土霉素0.07 μg/L、金霉素 0.07 μg/L、阿奇霉素0.07 μg/L、罗红霉素0.07 μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 生活饮用水及其水源水中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪、头孢氨苄、氧氟沙星、四环素、土 霉素、金霉素、阿奇霉素、罗红霉素10种抗生素残留物通过HLB固相萃取柱富集提取，洗脱液氮气吹干 后，用超高效液相色谱质谱联用仪进行测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，水，GB/T 6682，一级。 4.1 试剂 4.1.1 甲醇：色谱级。 4.1.2 甲酸：色谱级。 4.1.3 乙腈：色谱级。 4.1.4 乙二胺四乙酸二钠盐（Na2EDTA）。 4.1.5 氨水。 4.2 HLB 固相萃取柱(500 mg 或相当)。 1 DB22/T 2838—2017 4.3 0.45um 滤膜。 4.4 标准品 4.4.1 磺胺嘧啶（CAS 号:68-35-9）：纯度均≥95％。 4.4.2 磺胺甲恶唑（CAS 号： 723-46-6）：纯度均≥95％。 4.4.3 磺胺氯哒嗪（CAS 号： 80-32-0）；纯度均≥95％。 4.4.4 头孢氨苄（CAS 号：23325-78-2）：纯度均≥95％。 4.4.5 氧氟沙星（CAS 号：82419-36-1）：纯度均≥95％ 4.4.6 四环素（CAS 号： 60-54-8）：纯度均≥95％。 4.4.7 土霉素（CAS 号：79-57-2）：纯度均≥95％。 4.4.8 金霉素（CAS 号：57-62-5）：纯度均≥95％ 4.4.9 阿奇霉素（CAS 号：83905-01-5）：纯度均≥95％。 4.4.10 罗红霉素（CAS 号（80214-83-1）：纯度均≥95％。 4.5 标准储备溶液：分别精确称取 0.0100g（精确至 0.0001 g）标准品，用甲醇溶解定容至 10 mL， 此标准溶液浓度为 1000 μg/mL，置于-18 ℃冰箱避光保存。保存期 5 d。 4.6 混合标准中间液：分别吸取 1.00mL 的 10 种抗生素的标准储备液于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，配成混合标准中间液。 4.7 分别吸取不同体积的混合标准中间液（4.8），配制成 0 µg/L，10 µg/L，50 µg/L，100 µg/L， 200 µg/L，500 µg/L 抗生素混合标准溶液。以各组分的浓度为横坐标，各组分对应的峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线。 5 仪器与设备 5.1 5.2 5.3 5.4 6 超高效液相色谱质谱联用仪：配有电喷雾离子源。 固相萃取装置。 氮吹仪。 电子天平：感量 0.1 mg。 样品 6.1 样品采集 采样时，使用玻璃容器采集5 L水样，避免聚乙烯及其他可能的污染物。 6.2 样品保存 样品于4 ℃冰箱密封冷藏保存，1 周内尽快萃取，并进行测定。 6.3 样品预处理 准确量取1000 mL环境水样，加入0.5 g Na2EDTA,充分溶解后经0.45 µm滤膜过滤,取过滤后的水样 置于锥形瓶中待过柱。上样前，将 HLB小柱依次用5 mL甲醇和5 mL水进行活化，上样时，流速控制在8 mL/min,上样结束后, 先用12 mL水清洗HLB小柱，在负压下抽干，最后用6 mL氨水-甲醇(5:95,v/v)洗脱。 洗脱液用氮气吹干,用初始比例流动相（80% 1:4）定容至 1mL ,待测。 2 DB22/T 2838—2017 7 试验步骤 7.1 样品处理 准确量取1000 mL环境水样，加入0.5 g Na2EDTA,充分溶解后经0.45 µm滤膜过滤,取过滤后的水样 置于锥形瓶中待过柱。上样前，将HLB小柱依次用5 mL甲醇和5 mL水进行活化，上样时，流速控制在8 mL/min,上样结束后, 先用12 mL水清洗HLB小柱，在负压下抽干，最后用6 mL氨水-甲醇(5:95,v/v)洗脱。 洗脱液用氮气吹干,用初始比例流动相（80% 1:4）定容至1 mL ,待测。 7.2 7.2.1 仪器测定 色谱参考条件: C18 柱（100 mm，1 mm.id.，1.7 μm）或相当者；柱温30 ℃；样品温度20 ℃；进样体积5 μL。 流动相: A 乙腈，B 为0. 1%甲酸水溶液; 洗脱梯度: 0 min～4. 0 min，80%～60% B; 4.0 min～6.0 min， 60%～0% B;6.0 min～7.0 min，0%～80%,7.0 min～10.0 min，80%。流速为 0.3 mL/min。 7.2.2 质谱参考条件 离子化模式：ESI+; 源温度:110 ℃；毛细管电压：2.0 kV；碰撞能量：3.0 V；脱溶剂温度：350 ℃；脱溶剂气流量（氮气）：550 L/h;碰撞气氩气：350 L/h；锥孔气流：50 L/h。抗生素的定性离子 对、定量离子对、锥孔电压、碰撞电压及保留时间见附录A表A.1。 7.3 标准曲线的绘制 分别吸取不同体积的混合标准中间液（4.8），配制成0 µg/L，10 µg/L，50 µg/L，100 µg/L，200 µg/L，500 µg/L抗生素混合标准溶液。以各组分的浓度为横坐标，各组分对应的峰面积为纵坐标，绘制 标准曲线。 7.4 样品测定 取待测试样，按照与绘制校准曲线相同的仪器分析条件进行测定。当待测样品浓度超出标准曲线线 性范围时，适当稀释后测定。 8 结果计算与表示 8.1 定性分析 在上述仪器条件下测定标准溶液及样品溶液。各检测目标化合物以保留时间和特征离子与定量离子 所对应的超高效液相色谱-质谱/质谱色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留 时间与标准溶液中目标化合物保留时间的相对偏差小20%；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标 准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。标准谱 图（详见附录A表A.2）。 表1 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% 20%～50% 10%～20% ＜10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 3 DB22/T 2838—2017 8.2 定量结果 根据标准谱图组分的峰面积进行定量。按式1计算出水样中各组分含量，以（µg/L）表示。 8.3 结果计算  1  V1  1000 V  1000  f ...................................................................... (1) 式中： ρ——水样中待测组分的浓度，单位为微克每升（µg/L）； ρ1——相当于标准曲线上各抗生素的质量浓度，单位为微克每升（µg/L）； V1——萃取液体积，单位为毫升（mL）； V——水样体积，单位为毫升（mL）。 f——稀释倍数。 9 精密度 质量在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的20%。 10 保证和质量控制 10.1 空白分析 每次分析至少做一个实验室空白，实验室空白中检出每个目标化合物的浓度不得检出。 10.2 校准 每批样品应绘制标准曲线，相关系数应≥0.995，否则重新绘制标准曲线。 每20个样品或每批次样品（少于20 个样品）应测定一个标准曲线中间浓度点标准溶液，其测定结 果与该点浓度的相对偏差应≤20%，否则，须重新绘制标准曲线。 10.3 平行样测定 每20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）需做1 个平行双样，平行双样测定结果的相对偏差应 ≤20%。 10.4 样品加标回收率测定 每20 个样品或每批次（少于20 个样品/批）需做1个样品加标样，加标样与原样品在完全相同的测 试条件下进行分析。加标回收率应在60%～120%之间。 11 废物处理 实验过程中产生的废液和废物应分类收集和保管，委托有资质的单位进行处理。 4 DB22/T 2838—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 质谱参考条件 抗生素的定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞电压及保留时间见表A.1。 表A.1 抗生素的定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞电压及保留时间 质量数 定性离子 定量离子 锥孔电压 碰撞电压