ICS 65.020.20 B 05 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/T 1507—2017 大豆皂醇测定方法 2017 - 12 - 10 发布 山西省质量技术监督局 2018 - 02 - 10 实施 发 布 DB14/T 1507—2017 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 化学结构 .......................................................................... 1 5 测定原理 .......................................................................... 1 6 试剂与标准品 ...................................................................... 2 7 仪器设备 .......................................................................... 2 8 测定步骤 .......................................................................... 2 9 结果计算 .......................................................................... 3 10 重复性 ........................................................................... 3 I DB14/T 1507—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西农业大学提出并归口。 本标准起草单位：山西农业大学。 本标准主要起草人：杜维俊、岳爱琴、赵晋忠、徐海军、王敏、张永坡、高春艳、高文梅。 II DB14/T 1507—2017 大豆皂醇测定方法 1 范围 本标准规定了大豆皂醇的化学结构、测定原理、试剂与标准品、仪器设备、测定步骤、结果计算和 重复性。 本标准适用于大豆种子、根、茎、叶以及种皮中大豆皂醇的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 22464 大豆皂苷 NY/T 1252 大豆异黄酮 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 大豆皂醇 大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，在大豆中主要以大豆皂苷形式存在，可由大豆皂苷水解 得到，具有五环三萜类典型结构。 4 化学结构 大豆皂醇主要成分为大豆皂醇A、大豆皂醇B和大豆皂醇E，其主要成分的化学结构见图1。 图1 大豆皂醇的化学结构 5 测定原理 1 DB14/T 1507—2017 大豆皂醇溶液在波长205 nm处有最大吸收峰，在一定范围内，峰面积与大豆皂醇的浓度成正比关系。 6 试剂与标准品 6.1 试剂 6.1.1 超纯水，冰乙酸（分析纯），浓盐酸（分析纯），正己烷（分析纯），乙腈（色谱纯），甲醇 （色谱纯），冰乙酸（色谱纯）。 6.1.2 提取液：含 0.01%乙酸的 70%乙醇溶液：取 700 mL 无水乙醇加 0.1 mL 冰乙酸，然后加水稀释至 1 000 mL。 6.1.3 水解液：1 mol/L 盐酸-甲醇溶液。 6.2 标准品 6.2.1 大豆皂醇 A（98%）、大豆皂醇 B（%）。 6.2.2 大豆皂醇标准液：准确称取大豆皂醇 A 和大豆皂醇 B 标准品（含量≥98%）各 5 mg 置于 5 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。每毫升溶液分别含有大豆皂醇标准品 1 mg。 7 仪器设备 所需仪器设备包括： a) 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器或紫外检测器； b) 振动球磨仪； c) 电子天平：感应量为 0.0001 g； d) 漩涡震荡仪； e) 台式离心机； f) 数显恒温三用水箱； g) 滤头：聚四氟乙烯滤头，0.22 μ m； h) 旋转蒸发仪。 8 测定步骤 8.1 提取 提取步骤如下： a) 将大豆各材料置于震荡研磨仪中， 1 600 rpm 漩涡震荡 30 s，材料备用； b) 准确称取 0.100 g 样品，放入 10 mL 的离心管中，加入 5 mL 提取液（70%乙醇+0.01%乙酸）； c) 漩涡震荡 2 min，浸提 24 h； d) 放入离心机，室温下 3 000 r/min 离心 10 min； e) 取上清液 2 mL，用 2 倍体积的正己烷萃取脱脂，用 0.22 μ m 滤膜过滤后密封保存备用。 8.2 样品溶液的制备 样品溶液的制备步骤如下： a) 准确移取 2 mL 大豆皂苷提取液于茄形瓶内，37 ℃旋干； b) 加入 1 mL 的 1 mol/L 盐酸-甲醇溶液，74 ℃水解 195 min； 2 DB14/T 1507—2017 c) 准确吸取水解液 0.5 mL，经 0.22 μ m 滤头过滤后密封保存备用。 8.3 高效液相色谱分析条件 高效液相色谱分析条件如下： a) 色谱柱：Amide-80 色谱柱，粒径 5 µm，柱长 250 mm，内径 4.6 mm； b) 流动相：含 0.1％冰乙酸的超纯水溶液，含 0.1％冰乙酸的乙腈溶液； c) 流速：1.0 mL/min； d) 检测器：二极管阵列检测器，205 nm 波长 e) 进样体积：10 µL。 8.4 色谱测定 在相同色谱条件下，分别将标准溶液和样品溶液注入高效液相色谱仪分析，根据保留时间定性，外 标峰面积定量。 9 结果计算 计算公式为： C（待测）=（C1×(V1÷V)×5/2）÷1 000 M ........................ (1) 式中： C——待测样品中皂醇的含量（mg/g）； C1——用标准曲线查得的样品溶液的浓度（μ 标准曲线）； V1——试样为1 mol/L的盐酸-无水甲醇溶液的实际体积（mL）； V——试样为1 mol/L的盐酸-无水甲醇溶液的标准体积（mL）； M——称取试样的质量（g）。 10 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。 _________________________________ 3