ICS 65.020.30 CCS B43 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2508—2022 绒山羊鲜精稀释液配方 Formula of cashmere goats fresh semen diluent 2022-01-25 发布 2022-02-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2508—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、巴彦淖尔市农牧科学研究所、鄂托克旗农牧技术推 广中心、阿拉善白绒山羊种羊场、内蒙古亿维白绒山羊有限责任公司、鄂尔多斯市立新实业有限公司。 本文件主要起草人：刘斌、马跃军、吴铁成、特日格勒、王涛、赵若阳、胥福勋、苏日娜、乌兰其 其格、王娜、高玉林、何云梅、李玉荣。 I DB15/T 2508—2022 绒山羊鲜精稀释液配方 1 范围 本文件规定了绒山羊鲜精稀释液配方的术语和定义，器械和药品试剂，要求，稀释液，稀释，分装 与标记，保存、运输和检查等技术内容。 本文件适用于绒山羊人工授精的鲜精稀释、保存及精液处理。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 2893 绒山羊饲养管理技术规范 DB15/T 2244.3 绒山羊繁殖技术规范 第3部分:人工授精 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 原精 original semen 采自绒山羊公羊未经处理的精液。 鲜精 fresh semen 原精稀释后未经冷冻的精液。 精子活力 sperm motility 在37 ℃环境下前进运动精子占总精子数的百分率。 精子密度 sperm density 每毫升精液中含有的精子数量。 1 DB15/T 2508—2022 精子畸形率 abnormal sperm percentage 畸形精子占总精子数的百分率。 4 器械和药品试剂 器械 电子天平（精度小于等于0.01 g），普通生物显微镜，水浴锅，羊用假阴道，开膣器，温度计，采 精架，输精器，恒温箱，烧杯，容量瓶（100 ml），量筒，锥形瓶，玻璃漏斗，玻璃棒，镊子。 药品试剂 无水葡萄糖，柠檬酸钠，乙二胺四乙酸（EDTA），蔗糖，青霉素，链霉素，新鲜鸡蛋，生理盐水， 蒸馏水，酒精，凡士林等,稀释液基础液所用试剂均为分析纯。 消毒 根据材质特点，做好清洗、消毒、烘干处理，金属及玻璃器械需进行高温消毒，假阴道内胎清洁干 净后用75 %酒精棉球消毒、待酒精挥发完全后再用生理盐水棉球擦拭备用。 5 要求 供精种羊 体质健康，无遗传病，不允许有已发布的动物防疫法中所明确的疾病，日常饲养管理按照NY/T 2893 的规定。 采精季节 最优的采精时间是8月下旬至11月下旬，也可在4月至5月。 精液品质 按照DB15/T 2244.3的相关要求进行采精，精液品质要求见附录A。 6 稀释液 配方 配方参见附录B。 配制 按稀释液配方，配制100 ml基础液，过滤消毒后，加入新鲜卵黄、青霉素、链霉素并混匀。所有稀 释液需现用现配。 标记 2 DB15/T 2508—2022 配制的稀释液在使用前要标记稀释液配方代号、配制时间和配制人员。 保存 稀释液冰箱4 ℃保存，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。 稀释 6.5.1 原精采集后应尽快稀释。 6.5.2 稀释倍数的确定：根据精子密度、活力，配种母羊数而定稀释比例，稀释后的精液，精子密度 8 大于等于 6×10 个，精子活力大于等于 65 %。采用配方一，最大稀释比例为 2 倍；采用配方二和配方 三，可以稀释到 5～15 倍。 6.5.3 稀释液与原精要求等温稀释,以原精温度为标准,来调节稀释液的温度，不能反过来操作。 6.5.4 稀释时,将稀释液沿盛精液的杯(瓶)壁缓慢加入到原精中,然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌, 使之混合均匀。 6.5.5 如作高倍稀释（10 倍以上）时,分两步进行，先加入稀释液总量的 1/3,混合均匀,静置 2 min～ 5 min 后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入,以防造成“稀释打击”。 6.5.6 稀释后静置 2 min～5 min 再作精子活力检查,检查合格后,即可进行分装与保存。 6.5.7 不同配方稀释液不应随意混合使用。 7 分装与标记 分装 原精稀释后采用试管等容器分装，容器材质应对精子无害并经清洗、干燥和灭菌处理，容器分装精 液时应与精液等温。 标记 原精稀释、分装后，标明生产单位、品种、公羊号、生产日期、稀释液配方代号和操作人。 8 保存、运输及检查 保存 鲜精用8～12层纱布包裹再置于0 ℃～5 ℃恒温箱中存放，每隔8 h，将精液重新轻轻混匀。 运输 运输过程中，将鲜精放置在0 ℃～5 ℃的恒温箱中，避免剧烈震动。 检查 输精前按照附录A对鲜精进行检查，检查合格后方可用于输精。 3 DB15/T 2508—2022 A A 附 录 A （规范性） 绒山羊精液品质评估方法 A.1 原精量 用带有刻度的集精杯直接读取原精量。 A.2 色泽 绒山羊的精液正常呈乳白色或浅乳黄色，如果颜色异常，应该弃掉。 A.3 精子密度 用血细胞计数法测定每毫升中精子数量，将20 μL原精液用3 % NaCl溶液稀释100倍。在200倍镜下 6 计数计数室5个大方格（四个角和中间处）内精子总数N，将该数乘以500万，最终精子数等于5×10 N个 8 /ml。精子密度大于等于6×10 个／ml为合格。 A.4 精子活力 用稀释液将原精液加以稀释，取一滴于载玻片上，盖上盖玻片，置于37 ℃显微镜恒温台上，在200～ 400倍下观察每个精液样本3个视野下的运动状态，主观评估范围为0 %～100 %。精子活力大于等于65 % 为合格。 A.5 精子畸形率 将精液样本用稀释液稀释100倍，取一滴制成抹片。自然干燥后，用95 %的酒精固定3 min，然后用 伊红染色5 min，再经水洗，自然风干后用相差显微镜观察，计数200个精子计算出精子畸形率，精子畸 形率小于等于20 %为合格。 4 DB15/T 2508—2022 B B 附 录 B （资料性） 稀释液配方 稀释液配方见表B.1。 表B.1 稀释液配方 成分 配方一 配方二 配方三 无水葡萄糖（g） 3.0 3.0 柠檬酸钠（g） 1.4 1.4 基础液 生理盐水（ml） 100 EDTA（g） 0.12 蔗糖（g） 1.8 蒸馏水（ml） 100 100 100 100 10 10 青霉素（IU/ml） 1000 1000 链霉素（IU/ml） 1000 1000 ≤24 ≤60 稀释液 基础液（容量%） 100 新鲜卵黄（容量%） 稀释后精液保存时间（h） ≤1 5